SPA17 表达与乳腺癌患者的淋巴结转移和更差的整体生存相关Hello，小伙伴们，又跟大家见面了啊，今天小编为大家带来的这篇文章是关于蛋白表达与乳腺癌预后关系的文章，该文章最近发表在Frontiers in Oncology 杂志上，影响因子4.416。
研究表明精子蛋白抗原17（SPA17）是具有免疫原性的，但是其在乳腺癌中的表达和作用仍不清楚。因此作者通过免疫组织化学和Q-RT-PCR在120个乳房组织样品中评估SPA17表达。评估SPA17表达与患者的临床病理参数和总体生存的相关性，并探讨了SPA17的功能。下面小编就从数据来源，方法以及结果展示等三个方面进行介绍：（1）来自GEO和Oncomine数据集的微阵列数据作者从Gene Expression Omnibus（GEO）中获得了GSE21422（基于GPL570平台）的基因表达谱并使用“limma”R包来筛选乳腺癌样本和正常乳房组织样本之间的SPA17。在该研究中分析了100个原发性乳腺癌样本和20个正常乳腺标本，这些样本取自2011年6月至8月在四川大学华西医院乳腺外科接受手术治疗的患者。作者通过回顾他们的病历收集乳腺癌患者的临床病理参数。每位患者在手术后进行年度随访，以确保获得可靠的预后信息。作者从美国购买了人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231。将细胞在补充有10％胎牛血清（FBS，Gibco）的高葡萄糖改良的培养基（DMEM，Gibco）中，在5％CO 2的潮湿气氛中于37℃进行培养。（1）超表达SPA17的MCF-7乳腺癌细胞和沉默SPA17的MDA-MB-231乳腺癌细胞的建立（2）定量实时PCR，Western-Blot和免疫组织化学为了动态研究乳腺癌组织和正常乳腺组织中SPA17表达的差异，作者下载了GSE21422数据集，其中包含9个乳腺导管原位癌（DCIS）样本，5个浸润性导管乳腺癌（IDC）样本和5个 正常乳房组织样本。首先，作者使用“limma”R包进行差异基因分析并筛选三组之间的差异基因并构建火山图和热图（图1A-C）。发现SPA17在DCIS和IDC中的表达分别是正常乳腺组织中的2.20和2.05倍。在DCIS和IDC组之间SPA17的表达没有显著差异（图1C）。此外，作者回顾了Oncomine数据库，发现在Curtis和The Cancer Genome Atlas数据集中，SPA17在DCIS和IDC组中的表达高于正常乳腺（图1D，E）。
接下来作者通过定量实时PCR和免疫组化，在100个乳腺癌标本和20个正常乳腺组织中进一步测定SPA17 mRNA和蛋白的表达。作者发现超过百分之六十的患者肿瘤大于2厘米（图2A）。结果显示SPA17蛋白在27％（27/100）的乳腺癌样本中表达，并且在正常乳房样本中均未表达（图2B-G）。SPA17 mRNA在乳腺癌标本中的表达与SPA17蛋白相似，但在正常乳腺样本中未表达（图2H）。这些结果为作者进一步探索SPA17在乳腺癌中的功能提供了强有力的支持。
作者的分析进一步揭示SPA17的表达与淋巴结转移，ER状态，PR状态，分子亚型，内分泌治疗和放射疗法有关（表1）。表1：Sp17表达与临床病理特征的关联 - 单变量分析。
数据显示，大约77.8％（21/27）的SPA17表达患者有淋巴结转移。SPA17 mRNA和蛋白质表达在大多数非腔内乳腺癌样品中是阳性的（图2H，3A）。进一步分析显示，61.8％（21/34）的淋巴结转移患者具有阳性SPA17表达（图3B）。这些结果表明SPA17可能与乳腺癌细胞的转移有关，从而影响乳腺癌患者的预后。作为潜在的预后和治疗靶标，作者进行了Cox回归单因素分析，结果显示SPA17，淋巴结转移，肿瘤大小，ER状态，PR状态，分子亚型，内分泌治疗和放疗均与总生存期相关。而SPA17，淋巴结转移，肿瘤大小，PR状态，Ki-67状态，分子亚型，内分泌治疗和放射治疗与无病生存相关（表2,3）。进一步的多变量分析显示SPA17和肿瘤大小是与总体存活相关的独立因素。SPA17，肿瘤大小和内分泌治疗是与无病生存相关的独立因素（表2,3）。表2：临床病理特征与总体生存率的关系 - Cox回归分析。
表3：临床病理特征与无病生存率的关联 - Cox回归分析。
然后作者进行了Kaplan-Meier分析，结果显示，有和没有SPA17表达的患者的DFS（p = 0.016，图3C）和OS（p = 0.005，图3D）的差异具有统计学意义。由于SPA17表达在乳腺癌淋巴结转移和三阴性和HER2阳性乳腺癌标本患者样本中更常见，作者认为SPA17表达可能影响乳腺癌患者的预后。
如上所述，作者发现SPA17的表达可能与乳腺癌的转移有关。SPA17的最低和最高表达分别在Luminal A和三阴性亚型乳腺癌中发现（图2H）。因此，作者选择了MCF-7和MDA-MB-231细胞系用于SPA17过表达和沉默的功能验证，并且Q-PCR和Western-blot证实MCF-7乳腺癌细胞几乎不表达SPA17，而MDA-MB- 231乳腺癌细胞高度表达SPA17。用含有SPA17 cDNA或EGFP cDNA的质粒感染MCF-7细胞后，通过Q-PCR和western-blot证实了SPA17在SPA17-MCF-7细胞中的过表达（图4A，B）。在用靶siRNA或对照siRNA感染MDA-MB-231细胞后，通过Q-PCR和western-blot也证实了MDA-MB-231细胞中SPA17的沉默（图4C，D）。作者进行的MTT实验表明，SPA17过表达并未增加MCF-7的增殖，而SPA17耗竭则略微抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖（ 图4E，F）。接下来的伤口愈合试验表明，与对照组相比，SPA17-MCF-7细胞单层中的间隙在24h内略微更快闭合（图4G）。与对照组相比，MDA-MB-231细胞单层中的间隙在24小时内略微更快闭合（图4H）。这些结果表明SPA17增加了乳腺癌细胞的迁移能力。在最后的Transwell测定中，通过聚碳酸酯膜迁移的SPA17-MCF-7细胞的数量在48小时显著高于MCF-7细胞（图4I）。然而，通过聚碳酸酯膜迁移的MDA-MB-231细胞数量在48小时显著高于MDA-MB-231-siRNA细胞（图4J）。这些结果表明SPA17增加了乳腺癌细胞的侵袭能力。
总之，以上的研究结果表明了SPA17在乳腺癌发生和转移中的重要作用，SPA17可能是改善乳腺癌预后的新治疗靶点。
Sperm Protein Antigen 17 Expression Correlates With Lymph Node Metastasis and Worse Overall Survival in Patients With Breast Cancer欢迎关注生信人
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