1.什么是引物设计

PCR的第一步就是引物设计。引物设计的好坏，直接影响了PCR的结果，因此这一步很关键。成功的PCR反应既要高效，又要特异性扩增产物。目前可以使用的引物设计软件很多，但仍有许多细节需要注意。

2.引物设计的3条基本原则

(1) 引物与模板的序列要紧密互补

(2) 引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构

(3) 引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应

3.引物设计注意事项

(1) 引物的长度一般为15-30bp，常用的是18-27 bp，但不应大于38bp。

(2) 引物在模板内应当没有相似性较高的片段，否则容易导致错配。

(3) 同源性或互补性：两引物间最好不存在4个连续碱基的同源性或互补性。

(4) GC含量：一般为40-60%。另外，上下游引物的GC含量不能相差太大。

获取基因全长cDNA 序列较常见的方法有：

（1）cDNA 文库筛选法

（2）快速cDNA 末端扩增法

（3）电子克隆法

4.常用的引物设计软件

vOligo 6

vPrimer Premier

vVector NTI Suit

vDNAsis

vOmiga

vDNAstar

vPrimer3 （已被GPS导航收录，你可以直接前往导航操作）

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